影响东莞电泳加工质量的因素

影响东莞电泳加工质量的因素主要由以下几个方面造成:

1．电泳介质的pH值

东莞电泳加工溶液的pH值决定带电物质的解离程度，也决定物质所带净电荷的多少.对蛋白质，氨基酸等类似两性电解质，pH值离等电点越远，粒子所带电荷越多，泳动速度越快，反之越慢。因此，当分离某一种混合物时，东莞电泳加工应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值，以利于各种蛋白质的有效分离.为了保证电泳过程中溶液的pH值恒定，必须采用缓冲溶液。

缓冲液的离子强度

溶液的离子强度（Ion intensity）是指溶液中各离子的摩尔浓度与离子价数平方的积的总和的1/2.带电颗粒的迁移率与离子强度的平方根成反比。低离子强度时，迁移率快，但离子强度过低，缓冲液的缓冲容量小，不易维持pH恒定.高离子强度时，迁移率慢，但电泳谱带要比低离子强度时细窄。通常溶液的离子强度在0.02～0.2之间。不同带电颗粒，因其所带电荷的性质和多少、形状和大小等差异，使其在同一电场强度、相同的支持介质和缓冲液的条件下，各自的泳动速度不同，从而使各种不同的带电颗粒如蛋白质、核酸等生物大分子得以分离。带电颗粒在电场中泳动速度以迁移率(mobility)表示。故迁移率可定义为带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度，是指在1V／m的电场作用下，带电颗粒每秒钟移动的距离(m)，其移动速率为m／s，迁移率以m2／(V·s)表示。而在实际应用中以cm2／(V·s)表示，因此通过测量d、l、V、t，便可计算迁移率。

I=1/2∑CiZi2 (I：离子强度；Ci：离子的摩尔浓度；Zi：离子价数. )

0.154M NaCl溶液的离子强度为：

I= 1/2(0.154×12+0.154×12)=0.154

0.015M Na2SO4溶液的离子强度为：

I= 1/2(0.015×2×12+0.015×22)=0.045

3．电场强度

东莞电泳加工电场强度（电势梯度Electric field intensity）是指每厘米的电位降(电位差或电位梯度）.电场强度对电泳速度起着正比作用，电场强度越高，带电颗粒移动速度越快。根据实验的需要，电泳可分为两种：一种是高压电泳，所用电压在500～1000V或更高.由于电压高，电泳时间短（有的样品需数分钟），适用于低分子化合物的分离，如氨基酸，无机离子，包括部分聚焦电泳分离及序列电泳的分离等。因电压高，产热量大，必须装有冷却装置，否则热量可引起蛋白质等物质的变性而不能分离，还因发热引起缓冲液中水分蒸发过多，使支持物（滤纸，薄膜或凝胶等）上离子强度增加，以及引起虹吸现象（电泳槽内液被吸到支持物上）等，都会影响物质的分离.另一种为常压电泳，产热量小，室温在10～25℃分离蛋白质标本是不被破坏的，无需冷却装置，一般分离时间长。电场强度是指每1厘米的电位降，故又称电位梯度，以V／cm表示。电场强度对泳动速度起决定性作用。在一定范围内，电场强度愈高，带电颗粒泳动愈快，根据不同电泳所需电场强度，可分为常压电泳和高压电泳。常压电泳一般在100～500V，高压电泳一般为500～10000V。纸电泳、醋酸纤维电泳、聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶电泳只需200～500V,而固相pH值梯度等电聚焦电泳则需要3000～5000V高压。电压与支持介质的长度有关，而电流与支持介质的横截面(或宽度)成正比。大部分电泳用恒压控制电场强度。在做管状圆盘电泳时，一般用调节每管的电流(mA)控制电场强度，在电泳过程中，保持稳定的电场强度或稳定的电流，是电泳成功与否的重要条件。

4．电渗现象

东莞电泳加工在电场中液体对于一个固体的固定相相对移动称为电渗.在有载体的电泳中，影响电泳移动的一个重要因素是电渗。最常遇到的情况是γ-球蛋白，由原点向负极移动，这就是电渗作用所引起的倒移现象.产生电渗现象的原因是载体中常含有可电离的基团，如滤纸中含有羟基而带负电荷，与滤纸相接触的水溶液带正电荷，液体便向负极移动。由于电渗现象往往与电泳同时存在，所以带电粒子的移动距离也受电渗影响；如电泳方向与电渗相反，则实际电泳的距离等于电泳距离加上电渗的距离.琼脂中含有琼脂果胶，，其中含有较多的硫酸根，所以在琼脂电泳时电渗现象很明显，许多球蛋白均向负极移动。除去了琼脂果胶后的琼脂糖用作凝胶电泳时，电渗大为减弱.电渗所造成的移动距离可用不带电的有色染料或有色葡聚糖点在支持物的中心，以观察电渗的方向和距离。

5．分子筛效应

在不同浓度和交联度的凝胶中，其孔径大小不同，通过分子筛效应可将不同大小的颗粒进行分离，其分离机制是小分子通过凝胶微孔，而大分子颗粒难通过微孔而使迁移阻滞，从而将被分离的颗粒，按分子大小的顺序排列进行分离。